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近日，著名打假人士方舟子，质疑普洱茶中含有黄曲霉毒素，呕吐毒素等致癌物质，引起茶界一片哗然，各界人士及网友们众说纷纭，同时方舟子也列举出广州疾控和南昌大学硕士论文对普洱茶相关毒素的检测结果，所采集样品均呈阳性。面对如此情况，聚光科技下属子公司上海安谱实验科技股份有限公司（以下简称“安谱实验”）立即安排实验，采用液相色谱法对普洱茶中的黄曲霉毒素，呕吐毒素进行了检测，用详实的数据、谱图来探究普洱茶中所含毒素的真实情况。
样品1：在茶叶商店里选择了存放长达9年的生茶
样品2：经过发酵技术发酵过的熟茶
一、普洱茶中黄曲霉毒素的检测（参考GB 5009.22-2016 食品中黄曲霉毒素的检测 第三法 高效液相色谱-柱后衍生法）
样品前处理
准确称取2 g 粉碎的茶叶试样，置于50 mL 离心管中，加入10 mL( 乙腈+ 水) 溶液（84+16），涡旋3min，超声15min，4000rpm离心8min。取4mL 上清液，加12mL PBS 缓冲溶液稀释，混匀，待净化
加标溶液：CDGG-116870-03 (o2si 品牌) 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 混标 1:0.3:1:0.3ppm 25uL
小柱操作
黄曲霉毒素免疫亲和柱(SBHL-20-0383,Beacon 品牌) 恢复室温后，让柱内缓冲液流完。
上样：控制流速1d/s
淋洗：5mL PBS 淋洗，5mL 水淋洗，淋洗完后抽干，
洗脱：用2mL 甲醇洗脱，控制流速1d/s 50℃氮吹到近干，用流动相定容到1mL，过滤，待进样。
色谱条件
a) 流动相：A：水,B：甲醇/ 乙腈(16+16)
b) 色谱柱：CNW Athena C18-WP 液相色谱柱 (4.6*150mm,5um)
c) 流速：1.0mL/min
d) 柱温：40℃
e) 进样体积：20μL
f) 检测波长：激发波长360nm; 发射波长440nm
二、普洱茶中呕吐毒素的检测（参考GB 5009.111-2016 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定 第二法 免疫亲和层析净化高效液相色谱法）
样品前处理
取2g 茶叶，加入20mL 去离子水，涡旋1min，超声20min，4000rpm 离心8min，取上清液2mL 过柱。
加标溶液: CDGG-014445-06 (o2si 品牌) 脱氧雪腐镰刀菌烯醇( 呕吐毒素) 标准品 200 ug/mL 于甲醇加标50uL
小柱操作
呕吐毒素免疫亲和柱（SBHL-20-0347,Beacon 品牌）恢复室温后，让柱内缓冲液流完
上样：2mL 上样液加到小柱上面，控制流速1d/s
淋洗：5mL PBS 溶液 洗涤，5mL 水洗涤
洗脱：2ml 甲醇洗脱，控制流速1d/s
甲醇氮吹近干后，加流动相定容到1mL。涡旋, 过滤, 待上机检测。
色谱条件
a) 流动相: 甲醇：水（2:8）
b) 色谱柱: CNW Athena C18-WP 液相色谱柱(4.6*150mm,5um)
c) 流速:1.0mL/min
d) 柱温:35℃
e) 进样体积:20μL
f) 检测波长:218nm
三、实验谱图
图1：黄曲霉毒素10ppb 标准品谱图（黄曲霉检测）
图2：生茶基质谱图（黄曲霉检测）
图3：熟茶基质谱图（黄曲霉检测）
图4：生茶基质加标10ppb 谱图（黄曲霉检测）
图5：熟茶基质加标10ppb 谱图（黄曲霉检测）
图6：呕吐毒素1ppm 标准品谱图（呕吐毒素检测）
图7：生茶基质谱图（呕吐毒素检测）
图8：熟茶基质谱图（呕吐毒素检测）
图9：熟茶基质加标1ppm 谱图（呕吐毒素检测）
四、实验数据
黄曲霉毒素
目标物
生茶基质
熟茶基质
生茶加标10ppb
熟茶加标10ppb
生茶加标回收率%
熟茶加标回收率%
黄曲霉 G2 （ng/mL）
0
0
3.9
5.9
39%
59%
黄曲霉G1 （ng/mL）
0
0
7
6.9
70%
69%
黄曲霉B2 （ng/mL）
0
0
8
8.3
80%
83%
黄曲霉B1（ng/mL）
0
0
8.7
8.1
87%
81%
呕吐毒素
目标物
生茶基质
熟茶基质
熟茶加标1ppm
熟茶加标回收率 %
呕吐毒素
0
0
0.92ppm
91.2
五、分析讨论
1、从数据上我们可以看出，市面上购买的普洱茶生茶和熟茶均没有检测到黄曲霉毒素和呕吐毒素。但是限于我们样品来源有限，从我们检测的样品来看，正常渠道购买的普洱茶一般都没有问题，大家可以放心饮用。
2、黄曲霉毒素B2、B1
的加标回收率可以达到80% 以上，但是G2、G1
平均只有40-70%，不是很稳定，后来经过排查，发现G2、G1极易降解，隔一段时间进样，峰面积就会降低很多，相对来说，B2，B1的回收率比较稳定，另外食品中最容易污染，关注度最高的也是黄曲霉毒素B1，并且是毒性最强，致癌性最强的毒素。呕吐毒素的回收率非常稳定，达到90%以上。
3、总体来说，免疫亲和层析高效液相色谱-柱后光化学衍生法检测普洱茶中黄曲霉毒素，免疫亲和层析净化高效液相色谱法检测呕吐毒素是非常可靠的方法，目前国家对黄曲霉B1的限值，玉米制品为20ppb，稻谷及其制品10ppb，小麦及其制品5ppb，呕吐毒素在玉米小麦中的限值为1ppm，根据国标方法，黄曲霉毒素的定量限达0.5ppb，呕吐毒素的定量限可以达到0.2ppm，均低于国家的限值。
六、黄曲霉毒素和呕吐毒素检测实验耗材包
货号
名称
规格
品牌
SBHL-20-0383
美国Beacon黄曲霉毒素总量免疫亲和柱（B1，B2，G1，G2)
3mL，20支/盒
Beacon
SBHL-20-0347
美国Beacon呕吐毒素免疫亲和柱
3mL，20支/盒
Beacon
CDGG-116870-17-1ml
黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2混标（GB/T 5009.22-2016）标准品
1 mg/L于乙腈， 1 ml于Certan Vial
O2SI
CDGG-116870-03
黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2混标（GB/T 5009.22-2016）方法2方法3 标准品
不同浓度于乙腈， 1 ml于Certan Vial
O2SI
CDGG-014445-06
脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素) 标准品
200 ug/mL于甲醇，1mL
O2SI
LAEQ-461572
Athena C18-WP 液相色谱柱
4.6*150mm，5um
CNW
SBHL-YQ-01
凯斯科光化学衍生器
PCS
凯斯科
SBEQ-CR0002
SPE 小柱连接件【1，3，6mL】，PP 材质
12 个/ 包
CNW
SBEQ-CR1012
CNW 12 位固相萃取真空装置
12 位
CNW
SCAA-114
亲水PTFE针式滤器
13mm*0.22um， 100 只/ 罐
ANPEL
SCAA-113
亲水PTFE针式滤器
13mm*0.45um， 100 只/ 罐
ANPEL
QBAA-002012
2ml 无针注射器
100 只/ 包
ANPEL
ABEQ-3300002-25
CNW 50ml 尖底离心管
25/袋
CNW
ADEQ-2600111
3ml 塑料巴斯德吸管、160mm、未灭菌
500/ 箱
CNW
VAAP-32009E-1232A-100
CNW 9mm 透明螺纹口自动进样瓶( 带刻度、书写)
2ml，12*32mm， 9mm，100 只/ 盒
CNW
VEAP-5394-09FRB-100
兼容Agilent 的9mm 蓝色开孔拧盖、含PTFE/ 橡胶隔垫，Bond
100/ 袋
CNW
CAEQ-4-003306-4000
HPLC 级别通用型乙腈( 也适用于生化，无水分析领域)
4L
CNW
CAEQ-4-003302-4000
HPLC级甲醇，梯度级
4L
CNW
EOFO-945605
Talboys 基本型旋涡混合器，230V/150W
外形尺寸： 20.3×10.2×14.0cm， 包装重量：5.3kg
Talboys
EDAA-2101TH
超声波清洗器，100W ( 带加热功能）
槽内尺寸: 300*150*100mm，4L
ANPEL
