纸上层析分离鉴定微量氨基酸分析鉴定显微镜

氨基酸的分离和分析鉴定

  蛋白质中氨基酸种类很多，为了研究蛋白质的组成和结构，以
及制备和鉴定的需要，必须进行氨基酸的分离和分析鉴定工作。常
用的方法很多，其中纸上层析和薄层层析法常用于氨基酸的分析鉴
定方面，离子交换法常用于氨基酸的分离制备和定量测定方面。此
外也常应用等电点、溶解度以及与专一试剂作用等方法来分离制备
某些氨基酸。在分析鉴定上还有微生物法、酶化学法以及根据某些
氨基酸的特殊基团的显色反应等。本节重点介绍纸上层析法和离子
交换法。

  纸上层析法
  纸上层析是分离鉴定微量氨基酸最简易有效的方法，一张滤纸，
几十毫升溶剂，就可把仅有几个微克的混合氨基酸分开，并加以鉴
定，既可作微量分离，又可作定性分析和定量测定。此法不仅应用
于氨基酸，也广泛用在糖、核苷酸、有机酸、抗菌素等的分离鉴定
上。
  具体操作时，先将样品点在滤纸一端距纸边约2～3厘米处，然
后将点有样品的一端浸入某一有机溶剂系统中，经毛细管作用使溶
剂从纸的一端流向另一端，样品中的混合物也得以分离，滤纸干后
再以适当显色剂或在紫外灯下观察所得的层析图谱，加以鉴定
  纸上层析一般属于分配层桁，它白g基本原理主要是根据被分
析的样品在二种不相混合的溶剂系统中的分配系数(即在二相中浓
度比值)不同而达蓟分离的目的，相当于一个连续的反向液液抽提
过程。纸上层析就是根据这原理，把一种溶剂固定在固体的支撑物
上，称固定相，由于滤纸纤维对水有较强的亲和力，一般能吸着22
％左右的水分，因此滤纸就是含有，固定相水的惰性支撑物，另一
饱和了水的有机溶剂相(如饱和酚水、正丁醇一乙酸一水)为流动相
，当流动相从含有氨基酸样品的滤纸上流过时，各种氨基酸就在这
固定相和流动相之间连续不断的抽提分配，根据各种氨基酸在这三
相中的分配系数不同，在纸上移动的速率也不同，当流动的溶剂移
动到一定的前沿后，各种氨基酸就分别集中在滤纸的不同部位而被
分开。

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