酶的制备实验

酶的制备实验-层析是纯化酶时常要经过的步骤

  制酶的实际操作方法与设备仪器一发生故障，即无法再继续
操作。切记手续能简则简，别无他法时，再改用比较复杂的方法。
 
  基本设备、特殊材料与试剂  测定酶活性少不了一台紫外可
见分光光度计，最好再联上一台记录仪，用以记录某段时间内酶反
应的过程。如果由于反应量过少或其他原因，用分光光度计无法测
量或测不准的时候，就要利用放射性同位素的高度灵敏性，在酶反
应的过程中混入某种放射性同位素，再用闪烁计数器
  测出反应的结果。
  酶的制备常免不了要离心分离。固然在工业上分离沉淀总是用
过滤的方法，但是在实验室里则以离心分离比较简便好用。离心分
离机以能使转室温度保持在0℃以下，转速能达每分钟二万转者最常
用到，大小各式转头最好具备。
  柱层析是纯化酶时常要经过的步骤。虽然在实验室中用普通玻
璃管、滴定管、甚至注射器就可以制成层析柱，而分离出来的液体
也可以人工分部收集(Fraction—collecting)，再用分光光度计逐
个试管去测定活性。但是如果能有一套设备，其中包括几支大小长
短不同的层析柱，一台自动分部收集器(Fractioncollector)，并
配有一部紫外监测仪(uvmonitor)，一台蠕动泵(Peristalticpump)
，和一具梯度混合器(Gradientmixer)，则使用起来极为方便省时
。这样的一套设备所值和分光光度计相仿，现以瑞典Pharmacia—L
KB公司的出品最为人所乐用。
  因为由生物体中提取酶要先将细胞破坏，所．以搅碎器(Blend
er)和匀浆器(Homogenizer)都是酶实验室常要用到的工具。其他如
精密天平、复电极pH计、搅拌器、制冰机等也都是一般生物化学实
验室所必需有的设备

(本文由上海光学仪器厂编辑整理提供, 未经允许禁止复制http://www.sgaaa.com)