单细胞培养是用离体的植物细胞

  植物单细胞培养

  单细胞培养是用离体的植物细胞，或将植物组织用酶处理使其
分散成单个的游离细胞，在无菌条件下，诱导分化获得单细胞无性
繁殖系的培养方法。可分为细胞悬浮培养和固体培养基培养两种。
细胞悬浮培养是将愈伤组织或较为分散的组织，在液体培养基中振
荡培养，产生分散的悬浮细胞，经过更换新的培养基(继代培养，s
ubculture)使细胞大量增殖，便可得到大量的细胞群体。固体培养
基培养时，将分离得到的植物细胞借助固体平板培养、微室培养等
方法，培养得到单细胞无性繁殖系。此技术可用于特定细胞的研究
，并已成为一些药物和次生产物的工业化生产以及无性系快速繁殖
、突变体选育的有效方法。在转基因植物的基因工程操作中，检测
目的基因是否导人植物细胞，常需要应用它。单细胞培养得到的大
量细胞，可以进一步通过组织培养分化出根、茎、叶，发育成一完
整植株。

  原生质体培养与细胞融合

  植物原生质体(protoplast)是指去掉细胞壁的“裸露”植物细
胞。原生质体在适当的外界条件下还可以再生出细胞壁，进行有丝
分裂，形成愈伤组织和诱发再生植株。外源的染色体、DNA或细胞
器容易导入原生质体，所以原生质体培养是植物细胞杂交、改造植
物品种的一种有用方法。全部过程包括原生质体分离、原生质体培
养、体细胞杂交、细胞壁诱生和再生植株的产生等环节。
  原生质体分离一般都采用酶解方法，将消毒过的植物组织置于
纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶的混合溶液中，使细胞壁降解获得
原生质体悬浮液，离心后可得较纯的原生质体。在细胞壁被溶解后
，胞间连丝会发生膨大，相邻细胞的原生质和细胞器通过膨大的胞
间连丝可以流到一起，实现原生质体的自发融合。这种自发融合一
般只限于一个物种之内，为了实现远缘物种之间的细胞融合
  原生质体融合有几种不同情况。一种是细胞质融合，细胞核
未融合，两核处在共同的细胞质中，成为异核体(heterokaryon)或
异核细胞(heterokal‘yocyte)；如果细胞质和细胞核都融合则成
为同核体(homokaryon)。异核体中的两个细胞核若亲缘关系太远，
其中一个核的染色体，会一个个被排除掉，甚至整个核完全消失，
但细胞质依旧是杂合的，成为细胞质杂种(cybrid)。
  经过融合处理后的混合原生质体，需要用较软的培养基支持原
生质体进行培养，同时要有一个设计周密的选择和鉴定程序，以便
及时、准确地识别出体细胞杂种或细胞质杂种。

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