破碎细胞膜制作匀浆

破碎细胞膜制作匀浆-生物细胞研究显微镜

在破碎细胞膜的方法中，以同轴匀浆器法最为常用。此匀浆器由一
个具有精密口径的

磨砂玻璃管，以及一个与之紧密配合的杵子所组成杵子与管壁之间
有O．05～0．5mm的间隙。当杵子借机械力高速转动时，组织细胞便在
杵子与管壁之间挤磨而破碎。匀浆管要浸人冰浴中借以散热，避免因高
速转动产生之热使酶变性失活。此法比较温和，但仍有10％的线粒体、
15％的溶酶体及过氧体受到损伤。若用高速转动的刀片来破碎细胞，则
对细胞器的损伤更大。超声波虽可因震动而使细胞破碎，但亦能使细胞
器受到破坏。另有一种高压匀浆法对单细胞的破碎很有效，是将细胞悬
液置于惰性气体(如氮)中，经一定时间平衡后，又使之骤然降至常压，
这时细胞内压大于外界，易使细胞破碎。

为了减少细胞器的破坏，制作匀浆时还必须选用适当的介质，以尽
量保持细胞器的形态、结构与功能。由于蔗糖的溶解度大，性质又不活
泼，既能保持细胞器的结构与功能，又可防止各细胞器的彼此聚集。常
用的浓度为0．25 mol，可维持衡定的渗透压，介质的密度和粘度也不
太大，分离所需的(离心)转速也不必太高。

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