动物细胞不同蔗糖梯度实验图像高倍显微镜

  从胞浆蛋白中分离膜囊泡

  实验中常常需要确定蛋白质是定位于胞浆中还是胞膜上，除此
以外，在对透化处理的哺乳动物细胞所进行的实验以及有囊泡出芽
形成参与的实验中，对膜和胞浆进行分离也常常是很有必要的。将
膜与胞浆分离的策略包括使膜透过碘克沙醇阻滞液而从大密度样品
中悬浮出来，此策略已扩大用于真核生物和细菌。因为蛋白远比膜
的密度大，它不会在梯度中漂浮而是会沉淀，所以此策略可以使二
者得到最大程度的分离。这种分离方法能避免从蔗糖梯度结果所得
出的任何含糊结论，因为在蔗糖梯度中由于沉降作用和扩散作用，
膜沉淀和蛋白质会慢速地向同一方向移动。在碘克沙醇溶液中蛋白
质与膜囊的密度之间的差异也会比在蔗糖溶液中大更多，主要是由
于碘克沙醇梯度具有更低渗透浓度。类似的方法也用于从高密度脂
蛋白中分离脂质体。

  内吞作用
  配体标记

  在大多数情况下，对内吞过程所进行的跟踪是通过配体来完成
的，配体可以使用放射性标记，可以最终通过作用底物而检测的共
价结合酶，或者胶体金来进行确定。除非配体自身就很容易被确定
，否则对配体所进行的这些修饰可能会改变它的化学行为，但这也
是很难避免的。这种方法的基本策略是将这些标记的配体在短时间
内注入组织或细胞，之后便可以对配体在不同胞内部件的活动进行
跟踪。

(本文由上海光学仪器厂编辑整理提供, 未经允许禁止复制http://www.sgaaa.com)