测量总蛋白质检测和分析

蛋白质的检测和分析

  在蛋白质纯化过程中，需要进行两种测量，最好对每个组分都
进行测量。必须测量总蛋白质和目的蛋白的量(通常是测量生物学
活性)。大多数常用分析方法的。没有一种确定蛋
白质是否存在的方法，就不可能分离蛋白质，因此，必须要有一种
分析方法(定量的或至少半定量的)来确定哪种组分中含有大多数的
目的蛋白。

  有的分析方法方便、快捷(如酶活性的即时分光光度法测量)，
有的则是既耗时又繁琐的生物学分析。后者可能需要几天才能出结
果，而且这种情况很棘手，因为当知道了蛋白质在哪个组分时，蛋
白质可能由于降解或失活已经丢失，而且，这种丢失直到下一步完
成并对其产物进行分析后才能清楚。因此，任何快速的分析方法都
具有优势，尽管往往会由于加快了分析速度而降低了准确性。
  测量总蛋白质很有用，因为这可以表明每一步的纯化程度，但
除非下一步特别依赖于有多少蛋白质存在，否则总蛋白质测量也并
不是十分重要，可以留出一个小样品，当纯化完成后再进行测量。
然而，知道最终产物(假设是纯样品)中有多少蛋白质则十分重要，
因为据此可以计算比活(如果该蛋白质有活性的话)，并可与其他制
备物的比活进行比较。通常的目标是获得尽可能高的比活(考虑到
回收率)，这意味着要保留尽可能多的目的蛋白，而最后总蛋白质
的量则越少越好。蛋白质分离和纯化方法
  蛋白质纯化的现有方法范围很广，从简单的沉淀(从19世纪就
开始使用)到复杂的层析和亲和技术，后者不断地得到发展和改进
。方法可被分成几种不同的类别(或许最好的一种是基于正在研究
的蛋白质的特性)，如根据蛋白质的特点，可以将方法分成明显不
同但又相互关联的4组：表面特征、结构、净电荷和生物学特性。

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