共聚焦显微镜,密度梯度常用于分析细胞信号转导过程

共聚焦显微镜,密度梯度常用于分析细胞信号转导过程

共聚焦显微镜，密度梯度经常用于分析跨膜运输和细胞信号
转导的过程。这些过程是与广泛的细胞活动相关的，例如分泌、生
物合成、内吞作用和病毒处理。密度梯度不仅用于分级分离主要的
亚细胞器，如光面内质网、粗面内质网和高尔基体，也用于分离亚
区室、反式高尔基网络、内质网一高尔基中间体、早期和晚期内体
、转运和分泌小泡以及膜小凹和脂筏等质膜结构。这一细胞生物学
研究的丰富领域也包括蛋白从胞浆向膜的转运，这个过程可能发生
在细胞分化过程中。

常常用于梯度分析的上样液是来自于简单除细胞核的上清液，而不
是如轻线粒体沉淀或是微粒体那样的已经部分纯化的成分。由于梯
度法不经常用于纯化一种特殊类型的膜，而是用于分析蛋白质或其
他分子从一个区室到另一个区室的易位过程，更重要的考虑是没有
任何潜在涉及的区室在梯度分离前的处理中丢失。像这样简单处理
的匀浆也可以减少实验所需的时间，并将操作次数减少到最小。
  许多年来，蔗糖梯度是用来分析这些膜区室的主要方法，这章
将会讨论很多使用蔗糖作为介质的成熟实验方案。然而碘化的密度
梯度介质，特别是Nycodenz@和碘克沙醇也逐渐地被用来实现这一
目的，这一章也会给出许多使用这些梯度介质的例子。与蔗糖相比
，这些介质有许多优点：作为密度介质，它们容易购买到，也容易
配制梯度溶液，而且与相似密度的蔗糖相比，它们的摩尔渗透压浓
度更低(特别是碘克沙醇溶液)，使得这些溶液的分辨能力比蔗糖溶
液的更高。

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