一般动物血管等超微结构常用灌注固定

一般动物血管等超微结构常用灌注固定-生物显微镜

要想获得良好的精确的酶活性定位，理论上必须充分考虑每一种影
响因素，但实际上很难做到，一般尽可能地选择最佳反应条件和最佳操
作步骤。

  取材和固定
固定能明显影响酶活性，但固定使细胞膜的通透性发生改变，有利
于底物和捕捉剂的渗透，也有利于形态结构的保存。固定方法按样品来
源确定。酶对任何一种固定液都是敏感的，如果因固定而很快丧失活性
(如琥珀酸脱氢酶)，那么只能用不固定的标本。但不固定标本酶活性过
高时，会出现反应产物过剩，或者由于酶往往是水溶性的，容易产生酶
本身的扩散移位，使酶活性不正确地分布。所以一般均用固定标本进行
酶细胞化学研究。固定的程度按酶的耐受性确定，对于那些耐受固定的
酶也不能过度固定，一般固定程序是，在切片的孵育时间为15—30min
左右时，尚能检出酶的活性为宜。

一般实验动物常用灌注固定，手术标本等用浸泡固定，其中血管或
心脏灌注固定的效果要比浸泡固定好。浸泡固定的主要缺点是固定剂穿
透慢，会导致组织深部固定不好，而且固定时间较长会使酶活性丧失。
血管或心脏灌注固定速度快，固定均匀，固定时间易控制，因此在保存
酶活性和保存超微结构两方面部比浸泡固定优越。但对于无法用灌注固
定的标本(如手术标本)则用浸泡固定。在进行大批功能性动物实验时，
几组动物需控制相同的酶反应条件，灌注固定操作时间较长，无法做到
使几组实验动物同时取材、同时固定，并保证固定条件基本一致，这时
一般只能用浸泡固定。

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