显微镜观察水溶液中标本最好选用浸水式物镜

显微镜观察水溶液中标本最好选用浸水式物镜

  观察水溶液中的标本(如活标本)时最好选用浸水式物镜。最近
几家显微镜厂商专门为使用共聚焦显微镜观察生理状态下的标本而
设计了大数值孔径的浸水式物镜。该物镜与之前所用的浸水式物镜
不同，它可供观察固定在盖玻片下方的标本，工作距离约为250微
米。
  油浸物镜的数值孔径可比浸水式物镜的数值孔径大。尽管目前
有些油浸物镜的工作距离约为200微米，但大多数油浸物镜的工作
距离都相当短(约为100微米)。只有用与浸油折光率匹配的介质固
定标本时，才能选用长工作距离的油镜。如果选用含水的固定介质
，则标本内厚度超过20微米左右处的图像效果将明显下降，图像效
果下降是由球面像差造成的。此外，z轴上的距离检测也需要校准
。物镜移动(d。K)所引起的标本内焦平面移动幅度(d。)取决于标
本折光率与浸入介质折光率的比值针孔大小是影响成像质量的重要
因素。与第一个最小艾里斑半径(近似于达到最大强度一半时的半
径)相同的针孔，允许来自焦平面的大部分光线到达检测仪，同时
阻止来自离焦区域的大部分光线通过。尽管它的横向分辨率不如选
用更小的针孔，但却比选用同样光学系统的传统显微镜要高20％。
在针孔半径逐渐减小至约0．2×艾里斑半径的过程中，横向分辨率
随之逐渐提高，但是如此小的针孔将导致95％的信号不能通过。

(本文由上海光学仪器厂编辑整理提供, 未经允许禁止复制http://www.sgaaa.com)