荧光显微镜的物镜尽可能采用较大的数值孔径NA

荧光显微镜的物镜尽可能采用较大的数值孔径NA

标本的特点为了增强荧光显微镜的使用效果，在设置荧光标本切片
时，应具备以下特点：
  载玻片应选用能透过短波紫外光的石英玻璃。厚度约为0．8—
1．2mm。过厚的玻片吸收紫外光较多，而且对暗视场聚光镜效果有
影响。载玻片应当光洁，无油迹，无划痕。
  盖玻片宜采用镀膜玻璃。一般表面镀有氟化镁等若干层对不同
波长的光起不同干涉作用的物质，这样可以透过荧光而反射激发光
。反回的激发光能再次激发标本，增强荧光的能量。
  标本取样不能太厚，尽量薄一些，散开要均匀，这样能使标本
得到充分、均匀的激发。尽量减少标本重叠，互相掩盖，否则因激
发不均匀，影响判断。
  标本封载剂必须采用无荧光性能，无色透明的物质。通常使用
分析纯甘油缓冲液，其中甘油体积90％，磷酸盐缓冲水10％，pH值
为7．2—8．5。固定盖玻片时，可用含量1％的明胶水，盖上玻片
后，以10％的福尔马林凝固。使用油镜观察时，注意不能使用普通
的香柏油。因为香柏油在紫外光照射下有轻微荧光效应，干涉观察
。此时可在香柏油中拌入适量的荧光熄灭剂如硝基苯，减少香柏油
的荧光效应。有条件时，最好使用纯檀香油，本身无固有荧光。用
纯甘油缓冲液也可代用，但折射率略低一些，宜配用甘油浸液物镜
。
  对镜头的要求
  为了提高荧光图像的亮度，荧光显微镜的物镜尽可能采用较大的
数值孔径NA，同时，物镜和高倍目镜中，透镜胶合不能使用加拿大
树脂胶。因为加拿大树脂胶主要成分冷杉树脂在紫外线光激发下会
发生轻度的荧光效应，干扰观察效果。所以荧光显微镜所用镜头的
透镜胶合，一般用聚乙烯醇一类的合成胶。这种镜头在普通显微镜
均可应用。

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