现代光学显微镜的分辨极限一般为2000埃

现代光学显微镜的分辨极限一般为2000埃-真菌观察

电子显微镜的研究方法
现代光学显微镜的分辨极限一般为2 000埃，研究真菌外部形态一
般不成问题，但要研究其更精细的超微结构就必须借助电子显微镜(简
称电镜)。常用于观察生物样品的电子显微镜有两种类型。一种是透射
电子显微镜(TEM)，另一种是扫描电子显微镜(SEM)。在观察真菌细胞内
部超微结构，了解真菌的入侵方式以及引起昆虫组织的病理变化等方面
需要进行透射电镜观察，事先需制备超薄切片，而在观察真菌各部分的
表面结构时常使用扫描电镜。(一)透射电镜样品制备

超薄切片制样过程同石蜡切片制样过程大体相同。它分为取材、固
定、漂洗、脱水、渗透与包埋、切片、染色等几个环节。然而，超薄切
片操作过程更为精细与复杂。虫生真菌的取材方法如下：

1．活体虫生真菌为了保持真菌细胞结构的生前状态，从活体上取
下组织后要在最短的时间内投入固定液。所用工具要锋利，组织应小，
一般以l立方mm为宜。

2．孢子对于某些虫生真菌孢子，可直接加入固定液后立即离心，
收集成团菌体。但有些孢子固定离心之后，孢子之间的连续性不佳，常
有分散的情况。对此要采取预包埋的方法。就是说，离心成团之后弃去
上清液，保持50℃温水浴，另外，称取19琼脂放于50ml沸水中，待琼脂
溶化后，轻轻滴入离心管，用解剖针搅拌，使琼脂与孢子混合．放入冰
箱内3—5分钟，立刻移至冷却的载玻片上予以切分，每片大约l立方mm
大小。这样，就可以采用和组织块完全一样的方法进行处理。

3．子实层用前述载片培养法培养，用光学显微镜检查，待开始产
孢后用锋利小刀连同琼脂块一起切成l立方mm大小，用于固定。

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