用PCR可以快速鉴定转基因植物

转基因烟草的PCR检测

  利用PCR可以快速鉴定转基因植物，它具有所需转基因植物基
因组DNA起始量少、快速、准确及鉴定转基因植物数量大等优点。
但要严格设置以野生型植物的基因组DNA为模板作为阴性对照，以
含有目的基因质粒为模板作为阳性对照，以求获得真实可靠的鉴定
结果。
  PCR产物经电泳检测在预计的分子质量处出现单一DNA条带，但
常常呈现含有明显条带的弥散区带，这在以核基因组DNA作模板时
常会出现，可能的原因有核基因组复杂度高、退火温度低、延伸时
间长、引物和模板量大等。

  RNA分离的最关键因素是尽量减少RNA酶的污染。因为RNA酶含
有肽链内二硫键，使其能抵抗长时间的煮沸和温和变性剂，变性后
也可迅速折叠，具有很高的稳定性。该酶的活性不依赖二价阳离子
激活，难以因金属离子螯合剂(EDTA)失活。RNA酶可耐受多种处理(
如煮沸、酸、碱)而不失活。RNase存在广泛，环境中的灰尘、各种
实验器皿和试剂、人体的汗液和唾液中均存在RNA酶。目前，尚无
使RNA酶失活的简易办法。

提取RNA包括破碎细胞，用酸性酚、SDS等蛋白质变性剂将RNA与蛋
白质分开，抑制内源的RNA酶，同时去除DNA、糖类、盐类等杂质，
最后纯化出RNA等步骤。由于RNA绝大多数以与蛋白质结合成核蛋白
体的形式存在，所以要使蛋白质变性与RNA分离。根据DNA与RNA在
不同pH下稳定性不同，使提取环境保持酸性可以防止RNA被降解。

(本文由上海光学仪器厂编辑整理提供, 未经允许禁止复制http://www.sgaaa.com)