应用图像显微镜观察青霉等属产孢结构载片培养技术

应用图像显微镜观察青霉等属产孢结构载片培养技术

载片培养技术  在离体观察时常用。利用此技术，真菌能在玻片上
萌发、生长，因此可观察到各个生长时期的结构特征。这种方法是在载
玻片和盖玻片中间夹上琼脂培养基，真菌在这种湿的空间里生长发育。
具体做法如下：

(1)在无菌培养皿中，制备适合真菌生长的琼脂平板，用无菌刀或
解剖针将凝固的培养基切成1 平方cm的小块。

(2)在培养皿的底部铺上滤纸，再在上面放一弯形玻棒，附上载玻
片和盖玻片，消毒，然后加入无菌水使滤纸湿润，为防止玻片上的雾气
，可配制含5％甘油的无菌水。

(3)在无菌条件下放一块琼脂培养基在载玻片上。也可将熔融的培
养基用无菌吸管或移液管移1～2滴到玻片上。

(4)在琼脂块四个边缘的中央接种孢子或菌丝。

(5)把消毒的盖玻片的中部盖在琼脂培养基上，然后在合适的温度
和光照条件下培养，滤纸如风干应补充无菌水。直至培养基四周开始产
孢。过早时尚未长出产孢结构，而过晚则盖玻片上已长满孢子，将无法
看清产孢结构。

(7)在一干净的载玻片上加一滴乳酚棉蓝，盖上粘附有真菌生长物
的盖玻片，制成半永久玻片，或滴一滴乳酚棉蓝液到培养真菌的载玻片
中央，盖上干净的盖玻片，也可在显微镜下观察。制作永久玻片多用0
．1％--0．2％的淡结晶紫染色。先将载玻片过酒精灯火焰略加热，使
产孢结构附着变牢，再滴加FAA或酒精甲醛固定2分钟，用滤纸吸干后，
滴上染色液染0．5—1分钟，然后在自来水下缓缓冲洗去多余的染料，
晾干后用加拿大树胶或中性树胶封成永久玻片。

拟青霉等属产孢结构上往往有水散性的分生孢子长链，用以上染色
方法都会破坏孢子链。为此应将长有完整产孢结构的盖玻片不染色、不
封片，直接观察、绘图或摄影，然后再染色制片。

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