用电子显微镜细胞中蛋白质在细胞内定位的检测

用电子显微镜细胞中蛋白质在细胞内定位的检测

光致交联和荧光技术用于检测转运过程
  利用交联技术已确定细胞质中可与新生输出蛋白质发生相互作
用的蛋白质组分。首先将这些研究中的输出蛋白质进行放射性标记
，然后采用截短的mRNA技术跟踪转运工程

  利用经透化处理的细胞检测核运输
  经透化处理的细胞对于研究细胞溶质因子和三磷酸核苷酸在核
运输中的必要性非常有用。用低浓度的洋地黄皂甙使细胞通透化，
质膜上发生穿孔，导致细胞组分释放，仅留下完整的核膜和其他细
胞器。使用荧光显微镜，借助一种可进入通透细胞的标记蛋白来检
测蛋白质向核内的输入。细胞生物学技术

  研究蛋白质的输出有赖于蛋白质在细胞内定位的检测方法。利
用电子显微镜可以清楚地看到真核细胞中的细胞器和囊泡。使用这
种方法时，标本被制成薄切片，在低温下包埋在塑料中，最大限度
地减少结构的改变，并用重金属盐染色。此外，免疫金电子显微镜
被用于确定蛋白质在细胞中的位置。这种方法利用抗体对目标蛋白
质进行处理，抗体上附着有小的金颗粒。对照抗体用来与细胞器或
囊泡中的目标蛋白质反应，使其与不同大小的金颗粒相连。小的和
大的黑点代表电子显微摄像中的金颗粒，经过比较可用来确定蛋白
质在细胞内的定位。检测活细胞中输出蛋白质的定位也是有益的工
作。

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