免疫荧光荧光显微镜技术在细胞生物学领域的应用

免疫荧光荧光显微镜技术在细胞生物学领域的应用

  免疫荧光染色技术，它可能是目前应用荧光显微镜最多的技术
。荧光团标记抗体可作为敏感而特异的探针，来标记固定细胞和／
或通透性细胞内的抗原，并能定位特定的蛋白质。若用不同荧光团
标记两个或更多抗体，并用它们来染细胞的话，则同时可见多种蛋
白质的分布。本单元讲述固定细胞与细胞染色的基本方法，以及发
现并解决潜在问题的技巧。

  随着选择性标记细胞内细胞器的荧光染料的发现，荧光显微镜
又多了一个用途，即用来检测活体内特定细胞分子的空间分布。用
选择性荧光探针标记三种细胞器(内质网、高尔基复合体与线粒体)
的方法，
  另一个较好的成像系统为共聚焦显微镜，它能收集标本内薄聚
焦面上的光线而清晰成像。
  共聚焦显微镜在细胞生物学领域的应用；详述如何实现共聚焦
光切片及如何重建标本的三维图像；也谈到了不同类型的共聚焦显
微镜系统(包括激光扫描、快速扫描及双光子)及其优缺点，并提供
一些建议，便于该仪器的使用。
  采用免疫过氧化酶法定位细胞内抗原。采用这种方法，在光学
显微镜及电子显微下均能检测蛋白质的分布，进而了解不同放大倍
数的细胞组织情况。本单元涉及一些关于确保抗体进入抗原所在的
细胞内位置、保持抗原特性以及在固定与染色过程中维持较好的细
胞形态的技巧。另外，也谈到了免疫过氧化物酶染色的优缺点以及
确保其成功的操作技巧。

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