使用膜滤器过滤细胞培养的溶液中沉淀物

使用膜滤器过滤细胞培养的溶液中沉淀物-细胞实验

溶液的过滤除菌
许多用于细胞培养的溶液中含有一种或多种对热不稳定的成分(如
抗生素)，或几种成分构成的体系(如磷酸盐缓冲体系)，如果将它们进
行高压蒸汽消毒，则会生成有毒的沉淀物。因此，使用膜滤器对这些溶
液进行冷消毒是最普遍的方法。

0．2μm微孔滤膜适于一般情况灭菌；然而，一些环境应激细菌(如
假单胞菌属SP．)及支原体就能够通过这类滤膜。为了能最大限度地去
除这些组织培养中常见的微生物污染，就要采用孔径为o．1灶m微孔滤
膜过滤培养液和血清。滤膜制造商可提供不同类型的滤膜。就细胞培养
而言，醋酸纤维素或硝酸纤维素滤膜通常用于过滤诸如培养液和缓冲液
等液体。值得注意的是，在使用前应该用热的去离子水冲洗薄膜，清除
其中可能引起细胞毒性的可溶性物质。尼龙膜含较少的表面活化剂或润
湿剂等可溶性物质；聚乙烯磺酸膜中含少量的可溶性物质并很少与蛋白
质结合。

预先除菌的、随时可用的一次性过滤系统省时省力，消除了早期过
滤方法存在的隐患。过滤器范围广，从小(≤lOml)到大(≥20L)，体积
不等。这种一次性的系统也适用于真空或正压过滤。许多生产商根据细
胞培养的使用要求，设计出特殊的过滤系统：灭菌膜、滤套和接收瓶，
并确保它们无细胞毒、无致热原。对于制备培养基，使用无细胞毒的醋
酸／硝酸纤维素滤膜，或其他相似的滤膜，以及食品级硅管。

注意：所有程序均遵循无茵技术。

  适于哺乳动物细胞的培养基

进行体外哺乳动物的细胞培养，其要点之一是在培养器皿中营造一
种生理环境和特殊细胞类型的特异性反应。液态培养基至少要为细胞提
供生长所需的营养物质、能量、恒定的pH和适当的渗透压。此外，培养
的外环境，尤其隔水式COz培养箱，一定要达到稳定的温度和湿度，以
防培养液蒸发，还要供给呼吸所需的02和维持培养液中碳酸氢盐缓冲系
统的C02。目前普遍使用的培养基一般由两部分组成：基础营养和补充
成分。它们的组成可有相当大的差别。无论怎样，完全培养基的这两组
成分都是细胞存活和增殖所不可缺少的。

注意：用于细胞培养的所有溶液和培养液，均应使用反向渗透系统
生产的纯净水配制；用后的培养器皿要用水冲洗，不要用消毒剂处理。

注意：所有与活细胞接触的试剂与器械一定要灭茵，同时采用相应
的无菌技术。

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