视频光学倒置荧光显微镜

视频光学倒置荧光显微镜-细胞器的超微结构检测

相关的视频光学／电子显微镜术基本方案
  相关的视频光学／电子显微镜术
  这种方法采用免疫金染色法和免疫过氧化物酶染色法来做电镜
标本的染色
  通常免疫金染色法常用来标记绝大部分抗原；而免疫过氧化物
酶染色法通常仅用来标记那些位于膜包被的小间隔内的抗原，这是
因为过氧化物酶反应生成的电子致密产物易从抗体结合处弥散开。
只有采用免疫金染色法才能标记位于胞质内的GFP融合蛋白质的抗
原决定簇。此外，HRP(辣根过氧化物酶)标记也适用于其他的抗原
决定簇。
  值得一提的是，许多用免疫荧光显示结果非常好的抗体在免疫
源性电镜染色中不甚理想，因为在多数电镜标本的固定过程中用到
的戊二醛很容易与抗原决定簇中的氨基酸基团桥联到一起；然而，
若是减少或者不用戊二醛会造成细胞内细胞器的超微结构无法很好
保存。如果免疫源性电镜标记行不通，可以采用一些调节手段 
将培养皿放于倒置荧光显微镜下，选择一个转染的目的细胞，确定
其在细胞定位栅
  格坐标上的相对位置，并在细胞定位栅格图上绘出(照出)其位置
。
  用多光子显微镜、激光扫描共焦显微镜或者数码荧光倒置显微
镜(通过计算机能获得一系列时延性图像)来观察选择的活细胞内
GFP标记结构的动态变化。
  在摄取图像的过程中，如果有感兴趣的图像，则向细胞培养基
中加入固定剂A(细胞培养基／固定剂A一1：1)。
  停止摄取影像，细胞在固定剂A内放置5～10min。如果需要，继
续摄取一系列细胞影像。

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