高解析低温免疫电子显微镜技术培养细胞的应用

高解析低温免疫电子显微镜技术培养细胞的应用

用免疫过氧化物酶方法定位培养细胞和组织的抗原

  在EM水平上运用免疫过氧化物酶标记与其他方法相比较有其自
身的优点：①敏感性高；②通过PLP的固定将细胞器及其结构在形
态保存上可达到传统的戊二醛固定样本的要求；③方法简单，除了
那些需要特殊包埋的样本外，不要求特别的技术与仪器。然而，免
疫过氧化物酶标记与免疫金标记方法相比有三个重要的缺陷：①免
疫过氧化物酶标记从本身来说不能定量；②免疫过氧化物酶不能避
免潜在的DAB反应产物的扩散而远离抗原抗体反应部位；③一般来
说，靠过氧化物酶进行免疫双标记是不可能的。尽管过氧化物酶有
其缺陷，但此方法对细胞膜连接细胞器的分子定位非常有用。
  在组织细胞内定位抗原可以提供一类有价值的数据，这类数据
可以作为用过氧化物酶标记技术在培养的细胞中获得的即定数据的
补充(见基本方案1)。因为运用这种方法通常能检测出大量不同类
型的细胞，所以该方法要求实验人员能熟练操作低温组织切片机。

  运用高解析的低温免疫金电子显微镜技术定位亚细胞蛋白质／
抗原，此方法可在超微水平上进行局部解剖生化的研究。
  运用这种方法最常遇到的染色困难是低质量的切片，缺乏特异
性标记，背景着色深，假阳性，对比弱。差的切片通常由于标本制
备不当或冰冻切片机不稳定。非特异性标记是由于在乙醛固定之后
抗体不能识别抗原；特异性标记最理想的对照是在一类不表达目标
抗原的细胞中过表达该抗原。假阳性常常在运用双标记时出现。在
这种情况下，金颗粒的两侧粘连在一起，之间距离小于20nm，这样
常常被误认为是只定位。栅格上的污点常常由试剂的磷酸化污染引
起。另外，在免疫孵育过程中切片干燥也会产生污点。

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