直接计数显微镜观察细胞数量

直接计数显微镜观察细胞数量-生物图像显微镜

长期以来，革兰氏染色法一直是用于微生物观察制样的最常用方法
。将少量的样品(约10μL)涂抹在显微镜载薄片中直径约1．5cm圆形区
域上。然后通过文火加热来热固定或通空气来干燥载薄片上的液滴。通
过一系列的着色和清洗步骤，该涂片用碘制剂染色、脱色，然后用一种
非特异番红精再次染色。因为碘与碳水化合物反应变成紫色，通过显微
镜观察，革兰氏阳性细胞呈现紫罗兰至紫色。革兰氏阴性细胞因为被其
LPS外包膜覆盖，不会保留碘的染色效果。相反，它们保留了由非特异
染色(番红精)赋予的粉红色。

随着对分枝杆菌和HP可能存在关系的担忧的不断增加，已经使得金
属加工液系统利益相关者关心抗酸性染色。分枝杆菌和放线菌细胞包膜
有典型的高脂肪含量。因此，当它们被酚品红液染料染色后，通过光学
显微镜观察它们呈现红色

直接定量计数法利用专门的计数池，将液体样品压缩成薄膜，覆盖
在一个校准的栅格里。另外，细胞也可以浓缩到一个过滤膜上。细胞或
者被事先染色(和对AFB的计数的操作相同)，或用相衬光学显现。分析
人员数每个显微镜区域的细胞数量(通过显微镜观察的圆形可见区域)，
计算每个区域的平均细胞数，然后根据预先确定的区域尺寸，计算每毫
升样品中的细胞量。

直接计数法的优势在于无需因方便观察而进行的微生物增殖。然而
，多数直接计数法不能区分取样时活细胞和死细胞。假设样品体积和显
微镜可视表面积很小，直接计数检测检出限度大约是2×10的6次方细胞
／mL的样品。直接计数工作量大，并且需要一定的专业技能。

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