电镜物理固定一般采用低温冷冻使之由液态变固态

  取样与固定

第一个遇到的问题是取样。首先要注意研究对象的空间和时间位置
。比如，想研究花粉发育，就要分期采取从幼小到成熟的花药；想研究
受精，就要估计受精过程的大致时间范围，在此期间分批采取子房与胚
珠样品。有些植物的受精过程较长，有数天至数月之久，取样可以按小
时或天数计；有些植物的受精过程短促到数小时内即已完成，那就必须
按分钟计，分批取样，才能捕捉受精的各个瞬间。

采集的样品是新鲜的生活材料，如欲观察其中的生活状态，必须设
法直接观察，但更经常的做法是对样品施行化学的或物理学的处理，使
之尽可能保持当时的细胞状态，这叫“固定”  (fixation)。固定的作
用可以用煮鸡蛋或腌制皮蛋来比喻：鲜蛋是溶胶状态的，不能用刀切；
煮熟或腌制后变成凝胶状态，便可以切片了。化学固定使用各种固定剂
，如光镜观察中常用的酒精、醋酸、福尔马林以及上述药品的种种混合
配方，电镜观察中的戊二醛、锇酸等。不过，经过化学固定，细胞已被
杀死，结构会发生改变，不可能完全保存生活时的原貌，所以观察结果
只能获得近似值。物理固定一般采用低温冷冻，使材料由液态变为固态
，犹如豆腐变成冻豆腐那样，也可以保存和切片。这种固定方法的最大
优点是能保存那些化学固定剂保存得不够理想的活性蛋白质(如酶)，因
此在免疫细胞化学研究上大派用场，甚至是不可或缺的手段。这是因为
，免疫细胞化学的研究目标是细胞内特定的抗原(主要是蛋白质分子)，
要通过抗原一抗体反应来对它们进行定位，而抗原很容易在化学固定中
遭到不同程度的破坏和流失，从而导致假象。而快速冰冻则可大大减少
这方面的损失。

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