落射荧光显微镜植物细菌细胞进行荧光测定分析

落射荧光显微镜植物细菌细胞进行荧光测定分析

  落射荧光显微镜能够对从植物组织回收的大量的细菌细胞进行
荧光测定分析，广泛用于对细菌基因表达的频率分布进行分析。

一种在共聚焦激光显微镜下对叶子上细菌GFP荧光进行原位测定的
方法。该方法是在叶片表面上进行荧光原位杂交，首先用多聚甲醛
固定叶片，然后用低浓度琼脂薄膜覆盖，以避免杂交过程对细菌细
胞空间分布的破坏。接着透过琼脂膜用共聚焦显微镜观察标记16Sr
RNA的 E. herbicola细胞，测定细胞的GFP报道融合蛋白的转录活
性通过这种方法可以测定某一特定细菌群落中基因表达的空间分布
模式。
  荧光蛋白DsRed的发现引起了人们的极大关注，因为在基因表
达研究中DsRed有潜力与GFP一起形成转录融合而作为一种细菌的内
在标记来应用。尽管有研究报告称在单细胞中GFP和DsRed能够被同
时激发，但是在荧光共振能量转移(FRET)成像中DsRed也是一个良
好的受体分子(以GFP或CFP为供体)。这些荧光蛋白质之间的相互作
用会干扰对荧光信号的定量分析，因此，用DsRed和GFP或其变种进
行双重标记的适用性还需要作进一步研究。

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