激光细胞技术能提高样品检测效率

激光细胞技术能提高样品检测效率-疫荧光检测

  人们还评价了采用激光扫描细胞技术，结合微分干涉对比(DIC
)确认的免疫荧光检测技术的应用，并与隐孢子虫卵囊人工显微镜
计数结果进行了比较。在30～230个的添加水平下卵囊的回收率达
到了50％。与传统显微镜观察相比，激光扫描细胞技术能提高样品
处理量，避免操作人员主观性和观察疲劳。
  尽管这些方法可以对环境水样进行分析，但还没有确证它们能
否在食品基质中应用。可能涉及寄生虫传播的果蔬与食品是多种多
样的，这样仅用一种方法很难实现寄生虫的分离。分子诊断检测技
术也是很复杂的一种方法，因为食品中抑制剂的存在会掩盖其中的
寄生虫。
  还可以开发免疫检测方法来对水样中的隐孢子虫进行鉴定。有
一种间接免疫荧光检测方法对食品基质中隐孢子虫的检测非常有用
旧L“一。
  适用于隐孢子虫的绝大多数纯化技术也适用于环孢子虫的纯化
(Ortega，私人通信)。隐孢子虫所用的蔗糖和氯化铯梯度离心也可
用于环孢子虫。业已证明，水过滤系统也能浓缩水源水样中的环孢
子虫。到目前为止，环孢子虫的单克隆抗体还没能制备出来。不仅
仅是因为卵囊有限，还因为卵囊细胞壁的抗原特性很弱。用包被了
凝集素WGA的磁珠来进行处理已证明是一种很有用的方法。
  人们已采用了各种不同的临床检测方法来用于环孢子虫的鉴定
。对环境样品进行检测时，自身背景荧光被证明是很有用的，尽管
这种检测方法不具有专一性。最初用于临床样品分析的PCR法也适
用于食品基质；但是，其他艾美耳球虫也可得到与环孢子虫相同的
扩增产物。可采用Mnll酶的限制性片段长度多态性来区分环孢子虫
和艾美耳球虫。利用PCR技术对环孢子虫进行分析的最大挑战是如
何从很少数量的卵囊中提取需要的DNA，以及如何控制出现的PCR抑
制剂。已经开展了各种各样的研究方法，包括基质螯合、反复冻融
处理、FI'A膜与DNA提取试剂盒等o。研究者还利用不涉及抽提的基
于过滤的实验方案来制备PCR所需要的DNA模板

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