用荧光显微镜计数微生物菌种培养

用荧光显微镜计数微生物菌种培养-细胞仪

要证明一个候选益生元的性质，最好是能反复地进行人类摄食实验
，并用选择性培养基的经典平板计数法来证明。这就需要厌氧取样，执
行绝对严格的厌氧操作，并且对广泛细菌属的典型总好氧菌和总厌氧菌
进行培养，例如拟杆菌、双歧杆菌、梭菌、肠杆菌、真杆菌和乳酸杆菌
。由于培养基不可能做到对所有细菌都有选择性，故对个别菌落要用显
微镜检测、细胞膜三甘油酯组成、典型发酵模式或16S rRNA技术来证明
。

更先进的新技术是荧光免疫原位杂交(FISH)法，其中选择性杂交细
菌可用荧光显微镜计数，或用高通量流式细胞仪来计数。

简单的报道单一微生物菌种在纯培养下或少数几个细菌属的细胞数
在复杂的混合细菌(例如粪便)培养条件中的增加，体内或体外实验的结
果都不能用来证明它具有益生元作用。这是因为这种有限的实验方法并
不能看作是高度复杂的肠道菌群，也不能反映其中细菌的相互作用。现
在只有两种食物组成是符合益生元标准要求的，即菊粉型果聚糖(inuli
n-type fructan)和反式低聚半乳糖。再者菊粉和低聚果糖已被认为是
典型益生元，因为其营养作用符合益生元概念的要求。

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