反美相色谱圆柱的采用新方法

反相柱主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3 10 m之间。反相柱固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。 反相色谱柱的使用方法: 1.先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再依次以相同的流速相同的用量用氯、异丙醇、甲醇、甲醇-水（50：50）冲柱子； 2.以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠（LUNA）水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再换成流动相； 3.配制流动相时，应各组分分别量取，比例较小的组分要精密量取，需调pH值时要精密到0.1； 4.反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围，pH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。理想的pH范围在pH3.0-7.0； 5.如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。