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NLRP3酶;含有NLR后裔Pyrin可定义酶3(NLRP3)改组酶

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放大字体  缩小字体    发布日期:2021-01-27  来源:仪器网  作者:Mr liao  浏览次数:70
核心提示:NLRP3蛋白;含NLR家族PYRIN域蛋白3(NLRP3)重组蛋白英文名称:Recombinant NLR Family, Pyrin Domain Containing Protein 3 (NLRP3)AVP; AGTAVPRL; A

NLRP3蛋白;含NLR家族PYRIN域蛋白3(NLRP3)重组蛋白

英文名称:Recombinant NLR Family, Pyrin Domain Containing Protein 3 (NLRP3)

AVP; AGTAVPRL; AII; AII/AVP; C1orf7; CIAS1; CLR1.1; FCAS; FCU; MWS; NALP3; PYPAF1; Cryopyrin; Cold Induced Autoinflammatory Syndrome 1; Caterpiller-Like Receptor 1.1

来源:原核表达

宿主:E.coli

规格:10μg  50μg  200μg  1mg  5mg

内毒素水平: 1.0EU/μg(LAL法测定)具体详见说明书

片段与标签:Cys671~Trp1033 with N-terminal His Tag

物种来源(人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猕猴、山羊、绵羊、马、牛、猪、鸡、狗等其他物种多物种)相同的名称,不同的物种。

NLRP3蛋白;含NLR家族PYRIN域蛋白3(NLRP3)重组蛋白性状:冻干粉

表达系统:  大肠杆菌

产品纯度: 95%-98%(SDS-PAGE & RP-HPLC)

保存条件:如果样品在2-4周内使用,可以在4°C低温储存。 

长期储存,建议添加载体蛋白(0.1%HSA或BSA),并储存在-20~ -80°C。避免多次冻融。

NLRP3蛋白;含NLR家族PYRIN域蛋白3(NLRP3)重组蛋白

蛋白重组表达策略组合

重组蛋白的表达往往不像理论那样一帆风顺,在实际的表达过程中有可能产生各种各样的问题。在选择一个的蛋白表达策略非常困难的情况下,那么采用看似笨拙的方法,有可能会成为一种意想不到的“成功捷径”,比如项目要求构建表达两种重组蛋白时,构建6种不同的表达质粒,意味着有36种不同的表达条件组合,通过高通量微量蛋白表达实验一次性就可获得蛋白表达条件组合,后续中式飞行试验和成本控制会变得相对容易。

蛋白原核重组表达服务具体流程

NLRP3蛋白;含NLR家族PYRIN域蛋白3(NLRP3)重组蛋白融合标签选择:

亲和标签:蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用:一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易;另一方面是为了促进某些不溶性蛋白可溶。蛋白标签可分两类:一类是短肽类标签;一类是长肽以融合蛋白(fused partner)形式共表达。使用不同的蛋白标签需要根据具体案例来分析。

不同的系统步骤稍微有些不同的,大致步骤如下:

真核表达系统的重组蛋白表达步骤:

a.  选择表达载体和宿主细胞(常用的CHO和HEK293)

b.  表达载体的构建

c.  无内毒素的质粒抽提

d.  细胞瞬时转染

e.  表达小试,条件优化

f.  表达分析和鉴定(SDS-PGAE和WB)

g.  大量表达

h.  亲和纯化

i.  检测和鉴定

原核表达系统的重组蛋白表达步骤:

a.  选择表达载体

b.  密码子优化

c.  基因合成/亚克隆

d.  转化表达菌株

e.  蛋白表达小试分析

f.  如果蛋白可溶,蛋白亲和纯化

g.  如果蛋白不可溶,则需要变复性来制备可溶蛋白。

h.  鉴定,包括SDS-PAGE和WB鉴定

NLRP3蛋白;含NLR家族PYRIN域蛋白3(NLRP3)重组蛋白表达蛋白的分析、纯化、检测

诱导表达成功后,表达蛋白的分析、纯化、检测应该顺当,按一般的实验步骤做没太大的问题。

虽然,在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少高级修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工,常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象等缺点,但原核表达具有的操作简单、快捷,需时较短,表达产量高,适合工业化等优点,仍是我们合成外源蛋白的选择。原核表达的全过程有许多不确定因素,所以每完成一步都得检验结果是否正确,当实验遇到困难时如何进行分析,找到问题的症结是我们实验的关键。

 

 

 


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关键词: 蛋白 表达 nbsp 重组 NLRP3
 
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