手机版|
二维码|
上海圻明生物科技有限公司
SHANGHAI QiMing BIOTECHNOLOGY CO.，LTD.
酪氨酸酶(tyrosinase， TYR ) 试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
酪氨酸酶又称多酚氧化酶，是由 Cu2+与酶蛋白结合的金属酶。酪氨酸酶是生物
体合成黑色素的关键酶，也是引起果蔬酶促褐变的主要因素，同时也对昆虫的免
疫及生长有重要影响。
测定原理： TYR 能够催化邻苯二酚反应生成邻苯二醌在 420nm 处有特征吸收峰 。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成：
提取液：液体 100mL 1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂 30mL 1 瓶，4℃避光保存；临用前加 25ml 蒸馏水溶解，用不完的试剂 4℃避
光保存一周。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（10 4 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提
取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定 步骤和加样 表：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 420nm，蒸馏水调零。
2、 测定前将试剂一、测定前将试剂一在 30℃放置 10min 以上。
3、 样本测定表
试剂名称（ L） 测定孔
样本 500
试剂一 500
4、在 1mL 玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录 420nm 下 10s 时的
吸光值 A1 和 3min10s 后的吸光值 A2。计算 A＝A2-A1。
注意：
如果 A 小于 0.005，可将反应时间适当延长或加大样本量.
TYR 活性 计算：
1、血清（浆）TRY 活性
单位定义：每 mL 血清（浆）在每 mL 反应体系中每分钟 A420 变化 0.01 为一个酶活力单位。
计算公式：
TYR（U/mL）= A V 反总 V 样 0.01 T =66.7 A
2、组织、细菌或细胞 TYR 活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟 A420 变化 0.01 为一个酶活力单位。
TYR（U/mg prot）＝ A V 反总 （V 样 Cpr） 0.01 T =66.7 A Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟 A420 变化 0.01 为一个酶活力单位。
TYR(U/g 鲜重）＝ A V 反总 (W V 样 V 样总) 0.01 T =66.7 A W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每分钟 A420 变化 0.01 为一个酶活力单
位。
TYR（U/10 4 cell）＝ A V 反总 (500 V 样 V 样总) 0.01 T =0.13 A
V 反总：反应体系总体积，1.07mL； V 样：加入样本体积，0.015mL；V 样总：加入提取
液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；
500：细菌或细胞总数，500 万。
关注本网官方微信 随时阅读专业资讯
