用多聚甲醛通常微粒蛋白vs91化学工业仪器网

所有的固定方案必须做到：①防止抗原丢失；②透化细胞以便使抗体进入；③尽量使抗原保持能与抗体结合的状态；④维持细胞正常结构。  常用的固定剂种类很多，固定剂的正确选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性。固定剂可分为两大类：有机溶剂和交联剂。有机溶剂如乙醇和丙酮能够去除脂类物质使细胞脱水，把蛋白质沉淀在细胞结构上。交联剂一般通过自由氨基基团把生物分子桥连起来，形成一个相互连接的抗原网。两种方法均使蛋白质抗原部分变性。因此，在细胞染色中，能够识别变性蛋白的抗体更加有用。在某些情况下，只有用此类抗体才能得到满意的结果。  往往凭经验选择固定剂。虽然许多人发现用交联剂固定细胞可以获得较好的结果，但没有通用规则可以参考。可以试用两种方法，然后选择较好的一种。  悬浮细胞染色通常用于检测细胞表面抗原。因为细胞呈悬浮状态，洗涤过程复杂，因此，应注意离心时间不要过长或转速太高。  1．所需溶液  4％多聚甲醛(临用前配制)、PBS。  2．操作步骤  (1)PBS配制4％多聚甲醛；  (2)用PBS洗涤细胞2次，用200g离心5min；重悬细胞。  (3)小心用4％多聚甲醛溶液悬浮细胞，细胞浓度约为1X106／m1 15min，间或摇动；  (4)200g离心5rain，用PBS重悬细胞，重复洗涤细胞2次；室温下静置  (5)用含0．2％TritonX-100或NP-40的PBS溶液透化细胞2min(室温)，有的抗原需15min，具体时间视抗原而定；  (6)200g离心5rain，用PBS重悬细胞，重复洗涤细胞2次。  此时的细胞标本可用于后续的抗体检测。

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