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促肾上腺皮质激素
放免疫分析药盒说明书
Adrenocorticotropic Hormone Radioimmunoassay Kit
一、概述及临床意义
ACTH是由垂体前叶细胞分泌的39个氨基酸组成的直链多肽，分子量4500，在循环中的半衰期仅为10~25min。ACTH的作用为促进肾上腺皮质增生、合成和分泌皮质类固醇，同时也促时肾上腺素、生长激素合成。ACTH的合成和分泌受下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、肾上腺皮质激素以及加压素的调节。我们利用ACTH的18~39片段的特异抗体，建立了特异、灵敏的测定血浆、体液中ACTH18-39片段的放射免疫分析方法。该抗体也能同组织、细胞切片中特异的ACTH和体外纯化的ACTH特异结合，用于临床组织化学诊断ACTH水平变化。因此该方法适用于肾上腺皮质功能亢进、异位ACTH综合征、肾上腺腺瘤上腺皮质功能减退等诸多临床疾病时血浆ACTH水平的监测。
二、测定原理
应用竞争机制原理，标准或样品中的ACTH和加入的125I- ACTH 共同与一定量的特异性抗体产生竞争性免疫反应。125I -ACTH与抗体的结合量与标准或样品中ACTH的含量呈一定的函数关系。用免疫分离试剂（P.R.）
将结合部分（B）与游离部分（F）分离后，测定结合部分的放射性强度，
并计算相应结合率B/B0。用已知标准ACTH含量与对应结合率作图，即得
标准抑制曲线。从标准曲线上查出对应结合率的待测样品中的含量。
三、试剂盒组成
规格 组份
100管
50管
制品状态
1）ACTH标准品（S0-S5）
6瓶
6瓶
固 体
2）125I- ACTH（红色）
1瓶
1瓶
固 体
3）兔抗-ACTH抗血清（兰色）
1瓶
1瓶
固 体
4）驴抗兔免疫分离剂
1瓶/55ml
1瓶/28ml
液 体
5）ACTH缓冲液（无色）
1瓶/25ml
1瓶/25ml
液 体
6）EDTANa2 10%
1瓶/3ml
1瓶/3ml
液 体
四、试剂的配制、使用方法和保存标准ACTH 溶液：使用前用缓冲液1ml溶解，混匀。2~8℃避光保存，在标识的有效期内稳定，浓度分别为0、5、15、45、135、405pg/ml。125I- ACTH溶液：使用前用缓冲液(100管10.5ml溶解，50管5.5ml
溶解)，混匀。如一次加样超过100管，两瓶混合后使用；2~8℃避光保存标识的有效期内稳定。兔抗-ACTH 抗血清：使用前用缓冲液(100管10.5ml溶解，50管5.5ml
溶解)，混匀。如一次加样超过100管，两瓶混合后使用；2~8℃避光保存标识的有效期内稳定。驴抗兔免疫分离试剂：1瓶，液体，2~8℃保存，在标识的有效期内稳定。加样前必须摇匀！样本处理
取静脉血2ml，注入含10%EDTA二钠30ul的试管中，混匀4℃,3000rpm离心10 min,分离血浆，待测；如不立即测量，可将样本密封后，置于2~8℃或-20℃储存备测，2~8℃保存不应超过48小时，-20℃保存不超过2个月。冰冻样品测定前，使样本置于室温或冷水中复融，再次4℃,3000rpm离心5 min,取上清测定。测定步骤
取圆底聚苯乙烯试管若干，用记号笔或特殊铅笔编号NSB，S0 S6和待测样品管等，然后用微量取样器按下表加样。
操作程序表 （单位： l）
管别
试剂
NSB
S0
S1 S5
待测
样品管
缓冲液
200
-
ACTH 标准品
100
100
待测样品或质控
100
125I- ACTH
100
100
100
100
兔抗-ACTH 抗血清
100
100
100
混匀，任取三管测总T，4℃温育18小时以上
驴抗兔免疫分离试剂
500
500
500
500
充分摇匀后，室温放置15分钟，3500转/分钟离心15分钟，吸弃上清，测各沉淀管的放射性计数(cpm)。数据处理联机处理:由电脑自动处理得出结果。注意放射免疫方法和免疫放射方法由于原理不同，处理软件也不一样，用户一定要使用适合的处理
软件进行数据处理。在此建议用户使用logit-log或四参数数据处理模式。手工作图或计算器处理:
1).百分结合率计算：设S0管计数为B0，各标准管或样品管计数为B，非特异管计数为NSB，则百分结合率计算公式如下：B/ B0=(B－NSB)/( B0－NSB) 100%
2).logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式如下:
logit=ln(B/ B0)/(1－B/ B0)
3)手工作图：以标准浓度取log值为横坐标，对应的logit值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标，对应的B/B0为纵坐标在logit-log坐标纸上画出标准曲线（理想化时是一条直线）。根据待测样品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。注意：如果使用普通坐标纸，查出的数值应取反对数才是zui后的浓度值。
4).计算器处理；使用有线性拟合功能的计算器，可以比较方便地计算出样品浓度值，具体操作方法请查阅计算器的使用说明书。如果用户需要可以和北方所，我们可以向您提供使用方法。
标准曲线举例（仅供参考，不得用于实际计算）。
项目
B/T
B/B0（浓度单位pg/ml）
NSB
零标准
5
15
45
135
405
%
2.5
45
91
74
56
32
14
本测定盒主要技术指标标准范围：5 405pg/ml灵敏度： 5pg/ml批内变异系数（CV）： 10%;
批间变异系数（CV）： 15%使用期限：见产品外包装。参考正常值：测定本所工作人员20例(21-45岁)早8：00血浆中ACTH浓度为7.9-32.1pg/ml均值17.3 5.73pg/ml;下午16：00血浆中ACTH浓度为10.7-30.5pg/ml，均值18.4 5.6pg/ml。测定门诊查体人群202例(14-76岁)，早晨空腹血清中ACTH
浓度为5.08-32.86pg/ml,均值14.56 6.22pg/ml。
由于地区及使用仪器不同,所测的正常值会存在一定的差异,所以本说明书提供的正常值仅作参考.各实验室能建立符合本实验室要求的正常值范围。注意事项收到试剂盒后，尽快存放在2~8℃；冻干品溶解后，应保存在2~8℃条件下，不要反复冻融。125I- ACTH一次使用不完时，可先用少量缓冲液溶解，分成若干支，-20℃保存，一次使用一支。实验前全部试剂应放置室温下平衡。本产品组份分为两类，即液体组份、 冻干组份。液体组份标签上的有效期是指未开盖、开封时当储存条件符合标签要求时的有效期限，但开盖开封后的有效期zui多为45天（具体期限见本产品说明书有关说明）； 冻干组份标签上的储存条件是指复溶后应采用的储存条件，而有效期是指未复溶条件下当储存条件符合标签时的有效期限，复溶后的有效期限在标签规定的储存条件下zui多为45天（具体期限见本产品说明书有关说明）。参考文献李振甲 激素的放射免疫分析 科学技术文献出版社 1985。Atsushi Tagaki etal核医学（日）15：275，1978Brrr WA et al:Lancet 2:12277,1975Chopraij:Clin Invest 54:583,1974Kenneth Detal:Jclin Endccrinol Metab 44:660,1977
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