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食物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒产品说明书
（中文版）
主要用途
食物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂是一种旨在通过过硫酸钾的参与，使染料ABTS氧化，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即抑制氧化等值浓度的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种新鲜食物总抗氧化能力检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。通过过硫酸钾（potassium persulfate）氧化2,2 -连氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）（2,2 -Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline- 6-sulfonic acid)，diammonium salt；ABTS）产生的ABTS自由基，衡量体系中抗氧化剂捕获自由基、消耗抗氧化剂的能力，在分光光度仪（730nm波长）的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。
产品内容
清理液（Reagent A） 500毫升
缓冲液（Reagent B） 20毫升
染色液A（Reagent C1） 1管
染色液B（Reagent C2） 1毫升
氧化液（Reagent D） 1毫升
标准液（Reagent E） 300微升
产品说明书 1份
保存方式
保存 清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
50毫升烧杯：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于标准样品配制的容器
4℃台式离心机：用于样品操作
200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析
实验步骤
样品准备
1、固态食品处理秤取1克固态食品或粉末到50毫升烧杯，杯口封口膜密封加入8毫升 清理液（Reagent A）搅拌30分钟，充分混匀继续加入 清理液（Reagent A）到终容量为10毫升过滤纸过滤，去除不溶性固体颗粒封口膜封口备用
2、液态食品处理移取5毫升待测液态食品到15毫升锥形离心管放进台式离心机离心10分钟，速度为1500g 移取上清液到新的15毫升锥形离心管（选择步骤）可以加入适量的 清理液（Reagent A） （选择步骤）过滤纸过滤（如果离心处理，样品仍然不清澈）置于冰槽里备用或放进-20冰箱里保存
二、标准液准备
准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管移取50微升 标准液（Reagent E）到1号管小心移取10微升 缓冲液（Reagent B）和40微升 标准液（Reagent E）到2号管，混匀小心移取20微升 缓冲液（Reagent B）和30微升 标准液（Reagent E）到3号管，混匀小心移取30微升 缓冲液（Reagent B）和20微升 标准液（Reagent E）到4号管，混匀小心移取50微升 缓冲液（Reagent B）到5号管将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
管号
缓冲液（Reagent B）
标准液（Reagent E）
测定体系
标准 Trolox浓度
1
0微升
50微升
150微摩尔/升
2
10微升
40微升
120微摩尔/升
3
20微升
30微升
90微摩尔/升
4
30微升
20微升
60微摩尔/升
5
50微升
0
0
样品测读
实验开始前，将－20冰箱里的试剂置于室温下融化，实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化，移取1毫升 染色液B（Reagent C2）到1管 染色液A（Reagent C1）里，混匀，置于暗室里室温下孵育过夜（16小时）后，标记为 染色工作液，避免光照。然后进行下列操作。
准备1个96孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔分别移取200微升 缓冲液（Reagent B）到96孔板里的每个孔里分别加入20微升 染色工作液 分别加入20微升 氧化液（Reagent D）加入10微升 缓冲液（Reagent B）到空白对照孔加入10微升上述配制的 标准液（Reagent E）到相应标准对照孔里加入10微升裂解样品（100微克食品总量）到样品孔里轻轻摇动96孔板，使其混匀室温下孵育1分钟即刻放进酶标仪里测读：730nm波长分析结果：构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD730nm）；横座标（X轴）为标准Trolox浓度（微摩尔/升）空白对照孔为zui大吸光单位（OD730nm）读数标准对照孔和样品孔为实际吸光单位（OD730nm）读数 根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）计算样品实际总抗氧化能力
【根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）X 0.25（体系容量；毫升） X 样品稀释倍数】 0.01（样品容量；毫升）＝（微摩尔/升TROLOX等值）
根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力（实际抑制百分率）
【（空白对照孔吸光单位读数－实际吸光单位读数） 空白对照孔吸光单位读数】X100％
IC50：50％抑制率所需的样品单位：TROLOX等值或样品重量（毫克/毫升）或样品容量（微升）
X（所需样品单位）＝（已知样品单位 实际抑制百分率）X 50％
注意事项
本产品为50次操作，包括标准品操作本产品测试范围为高浓度30至150微摩尔操作时，须戴手套样品制备的所有操作均须在4℃状态下进行测试前，样品须新鲜收集样品须清澈样品避免含有Tris、EDTA和还原剂等空白对照孔的吸光读数应为2.0以上，如果低于1.5，不能用于高浓度检测，须增加 染色工作液的室温孵育时间 染色工作液避免反复在室温空气中久置。如果空白对照孔的吸光读数为3.5以上，建议使用无离子水稀释到2.5至3.0则可样品读数越低，抗氧化能力越高样本量不宜超过20微升可以使用比色皿检测如果样品抗氧化剂浓度过高或过低， 建议稀释或增加样品浓度 如果测试样品很多，建议使用排枪移液如果用户没有730nm波长滤波器，可以使用640nm至810nm之间的任一波长替代；或者使用405nm波长替代本公司提供低浓度测试试剂产品本公司提供系列抗氧化分析试剂产品
质量标准
本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测敏感
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