血凝和血凝抑制作用试验中vs91化学工业仪器网

血凝和血凝抑制试验

某些病毒能够与人或动物的红细胞发生凝集，这称之为红细胞凝集反应（HA）。这种凝集反应克被加入的特异性血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验（HI）。
1、材料

器材：V型96孔微量滴定板，微量混合器，塑料采血管，50毫升移液管。

稀释液：用蒸馏水或无离子水配成0.85%氯化钠溶液（生理盐水），高压灭菌备用。

抗原：由指定单位提供

红细胞：采健康成年公鸡血，抗凝，用20倍量生理盐水洗涤3-4次，每次以2000转/分离心3-4分钟，zui后一次5分钟，配成1%或0.5%悬液备用。

血清：标准阳性血清，被检血清（从被检鸡的翅静脉或心脏采血，分离血清备用）

2、操作方法

微量血凝试验（HA） 将V型血凝板的每孔中滴加生理盐水0.05毫升，共滴四排。吸取1：5稀释抗原滴加于*列孔，每孔0.05毫升；然后，由左至右顺序倍比稀释至第11列孔，再从第11列孔各吸0.05毫升弃去，zui后一列不加抗原作对照。于每孔中加入0.5%红细胞悬液0.05毫升。置于微型混合器上震荡1分钟，或用手持血凝板绕圈混匀。放室温下（18~20℃）30~40分钟，根据血凝图像判定结果。以出现完全凝集的抗原zui大稀释度为该抗原的血凝滴度，每次四排重复，以几何均值表示结果。计算出含4个血凝单位的抗原浓度。计算公式为：抗原应稀释倍数=血凝滴度/4。

3、微量血凝抑制试验

常用固定病毒稀释血清法，在96孔V型板上进行，用50微升移液管加样和稀释。先取生理盐水0.05毫升，加入第1孔，再取浓度为4个血凝单位的抗原依次加入3~12孔，每孔0.05毫升，第2孔加浓度为8个血凝单位的抗原0.05毫升。用稀释器吸被检血清0.05毫升于第1孔（血清对照）中，挤压混匀后吸被检血清0.05毫升于第1孔（血清对照）中，挤压混匀后吸0.05毫升于第二孔，依次倍比稀释至第12孔，zui后弃去0.05毫升。至室温（18~20℃）下作用20分钟。用稀释器滴加0.05毫升红细胞悬液于各孔中，振荡混匀后，室温下静置30~40分钟，判定结果。每次测定应设已知滴度的标准阳性血清对照。

4、结果判定

在对照出现正确结果的情况下，完全抑制红细胞凝集的zui大稀释度为该血清的血凝抑制滴度。 （来源：上海锐聪实验室设备有限公司）

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