免疫组化sabc法则的理论和灵活性vs91化学工业仪器网

免疫组化sabc原理是亲和素（Avidin）存在于鸡蛋中，分子量67000。是一种碱性蛋白质，具有对生物素近乎于共价键的结合力。链霉亲和素是一种从链霉菌（Streptomyces Avidinii）培养物中所提取的蛋白质，分子量47000，不含糖链，等电点IP=6.0-6.5。和亲和素一样，也有四个生物素结合位点，亲和力高达10-15M。和亲和素相比，链霉亲和素更为。现在经过改进的亲和素等电点IP可以达到7.0，明显地消除了原碱性蛋白特征所引起的非特异性吸附。免疫组化sabc法集中体现了目前先进的免疫组化所必必具备的高敏感性、特异性及操作快速、简便的所有特征。

免疫组化sabc法的特点：
1.稳定性好：链酶亲和素结合生物素的亲和常数是抗原结合抗体反应的百万倍，二者结合形成复合物的解离常数很小。因此，SABC法在实际应用中，稳定性高，减少了操作误差，提高了检测的度
2.特异性高：链酶亲和素与生物素间的结合具有的亲和力，其反应呈高度特异性。因此，SABC法的多级放大作用不仅可以提高检测的灵敏度，同时还避免了非特异性干扰
3.高敏感性：生物素容易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合，形成生物素衍生物结构，该结构具有保持大分子物质的原生物活性功能，同时，每个链酶亲和素分子有四个生物素结合部位，可以多价形式同时结合生物素化的大分子衍生物和酶标记物。因此，SABC法具有多级放大作用，使其在免疫组化实验时大大地提高检测方法的灵敏度。

附免疫组化sabc法操作步骤：
1.切片脱蜡至水
2.新鲜配置3%H2O2,室温10分钟,灭活内源性酶，然后用蒸馏水冲洗2分钟三次
3.微波修复：将切片放入盛有PBS缓冲液（PH7.2-7.6）的杯子中，在微波炉里加热煮沸，微波炉中静置５分钟，拿出室温冷却６分钟，再微波续热至沸腾后完全室温冷却
4.滴加5%BSA封闭液,37℃反应30分钟。甩去多余液体,不洗
5.滴加一抗，4℃反应24小时左右。所配一抗的浓度为1 g/ml

6.PBS缓冲液（PH7.2-7.6）洗1０分钟 3次，滴加生物素化二抗IgG（抗兔或抗鼠）37℃反应30分钟
7.PBS缓冲液（PH7.2-7.6）洗1０分钟 3次，滴加试剂SABC，37℃反应30分钟，PBS洗3０分钟 3次
8. DAB室温显色,镜下控制反应时间，蒸馏水洗涤
9. 滴加苏木素轻度复染60秒，蒸馏水洗涤后浸入饱和Na2HPO4溶液中2分钟，取出后洗涤，３７℃恒温箱干燥经过12个小时左右，中性树胶封片。 （来源：上海索莱宝生物科技有限公司）

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