使用者針對所調配的溶液做吸收度量測,溶液的濃度越高,對光的吸收率越大。其原理就是利用該溶液對某些特定波長光線的吸收程度,推算光吸收率。 光源發射光後,經過光柵,此時的光強度為I0,通過樣品的光路徑稱為L,光被吸收後的光強度為I,再經由偵測器偵測及計算後轉換為吸光值,吸收度的公式如下: 吸收度(A)=log(I0/I)=εcl c:樣品濃度 l:光徑長 ε:樣品莫耳吸光係數 由於光徑長固定,可視為常數,因此吸光度與吸光物質的濃度成正比。
測量核酸(DNA or RNA)濃度時,可以依據該核酸樣品對320nm光波的吸收率來計算其濃度,通常可以寫為A320或OD320。"A"即"Absorbance(吸收度)";"OD"即"optical density(光學密度)"。 20個標準胺基酸中,3個芳香族氨基酸-Phenylalanine、Tyrosine及 Tryptophane,因為有苯環的構造,會吸收紫外線的光。下圖為相同胺基酸濃度下,波長280nm 的吸收光譜,由圖可知,Tryptophane吸光強度最強,呈現最高的波峰,Tyrosine次之,Phenylalanine吸收程度最差。由於蛋白質中大多含有這3種胺基酸,因此大部分的蛋白質都會吸收紫外線。由此特性,波長280nm 的吸收光譜可作為蛋白質的定量分析的一項利器。
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