手机版|
二维码|
产品名称
货号
规格
保存
价格(元)
蛋白酶K溶液（20mg/ml）
D1009L1162
2 mL
-20 ℃
120
产品简介
蛋白酶K（Proteinase K），相对分子量约为29.3 kDa, 是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。可切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，应用广泛，可用于制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶等实验，蛋白酶K的一般工作浓度是50 100 g /ml。因蛋白酶K在变性剂如SDS（1%）中可提高其活性，所以在使用中，常根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素、pH、温度等因素确定具体的工作浓度。蛋白酶K在较广的pH范围内（pH 4-12.5）均有活性。
蛋白酶K有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染核酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消化过程中通常也加入EDTA（以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGTA（ph8.0）至终浓度为2mmol/l，以鳌合Ca2+。
运输和储存
冰袋运输，-20 ℃保存，可以保存12个月。避免反复冻融。
使用方法
1. 配制蛋白酶K溶液：一般以20mg/ml浓度配制蛋白酶K溶液。将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml dd水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
2. 根据终浓度50 100 g /ml，吸取适量蛋白酶K溶液，到待消化样品中，孵育温度为55至65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。
注意事项
蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的样品处理，它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用，能增加探针与靶核酸结合的机会，提高杂交信号。但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时，都会对细胞的结构有一定的破坏，导致组织切片的脱落，细胞核的消失，从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用，解决上述出现的问题，并能达到理想的染色效果。
常用蛋白酶作用位点
蛋白酶
分类
作用位点
已知抑制物
氨基肽酶
金属蛋白酶
带有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不能分解由X-Pro、D或Q组成的肽键
2,2-双吡啶，1-(1)-菲咯啉
菠萝蛋白酶
巯基蛋白酶
无特异性
2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化
羧肽酶A
锌金属蛋白酶
带有自由氨基酸的L-氨基酸羧基端；不能分解R、P或羟脯氨酸
EDTA，EGTA
羧肽酶B
锌金属蛋白酶
K，R羧基端
EDTA，EGTA，碱性氨基酸
羧肽酶Y
丝氨酸羧肽酶
氨基酸羧基端
PMSF
组织蛋白酶C
琉基蛋白酶
氨基端双肽，可通过K，R或P氨基端作为第二或第三个氨基酸封闭
醋酸碘， 甲醛
胰凝乳蛋白酶
丝氨酸蛋白酶
在F，T或Y之后
抑肽酶，PMSF，TPCK， 巨球蛋白
胶原酶
金属蛋白酶
在P-X-G-P肽链中X之后
EDTA，EGTA，还原剂，但无血清存在
dispase
金属蛋白酶
无特异性
EDTA，EGTA，Hg2+，重金属
内肽酶Arg-C
丝氨酸蛋白酶
在R之后
巨球蛋白，TLCK
内肽酶Asp-N
金属蛋白酶
在D和半胱氨酸之前
EDTA， 菲咯啉
内肽酶Glu-C
丝氨酸蛋白酶
在E或D之后
巨球蛋白，TLCK
内肽酶Lys-C
丝氨酸蛋白酶
在K之后
TLCK，抑肽酶，抑蛋白酶醛肽
肠激酶
丝氨酸蛋白酶
在D-D-D-D-K-肽链中K之后
Xa因子
丝氨酸蛋白酶
在R之后
PMSF，APMSF，大豆胰蛋白酶抑制物
无花果蛋白酶
琉基蛋白酶
无特异性
TPCK，TLCK， -巨球蛋白
激肽释放酶
丝氨酸蛋白酶
在一些R之后
抑肽酶，抑蛋白酶醛肽
木瓜蛋白酶
巯基蛋白酶
长期孵育时具有广泛特异性
TPCK，TLCK，抑蛋白酶醛肽 巨球蛋白，烷化剂
胃蛋白酶
酸蛋白酶
广泛特异性
胃蛋白酶抑制素
纤溶酶
丝氨酸蛋白酶
在K或R之后
PMSF，TLCK，抑肽酶， 巨球蛋白
链霉蛋白酶
混合型
无特异性
B．M．完整药片
蛋白酶K
丝氨酸蛋白酶
广泛特异性
PMSF，PefablocSc
枯草杆菌蛋白酶
丝氨酸蛋白酶
无特异性
PMSF， 巨球蛋白，苯甲脒
热溶素
锌金属蛋白酶
在非极性残基之前
EDTA
凝血酶
丝氨酸蛋白酶
在K之后
TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽
抑肽酶， 巨球蛋白，苯甲脒
胰蛋白酶
丝氨酸蛋白酶
在K或R之后
TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽
抑肽酶， 巨球蛋白
以上信息由企业自行提供，信息内容的真实性、准确性和合法性由相关企业负责，91化工仪器网对此不承担任何保证责任。
馨提示：为规避购买风险，建议您在购买产品前务必确认供应商资质及产品质量。
