图1 多光子显微镜基本套件 本系统的光路图如图2所示
图2 多光子显微镜套件光路图 多光子显微镜系统在生物学领域的一个成功实例是活体细胞成像。多光子显微技术非常适合于样品需要长时间成像的活体细胞研究。其高速扫描特性减少了在活体细胞成像过程中的光漂白效应,这对于细胞成像是很有利的。Thorlabs公司的多光子系统通过一个扫描振镜对实现高速扫描。该系统还采用近红外双光子激发效应,促进了样品的深度渗透,将光漂白效应Z小化,与单光子激发技术相比降低了光学毒性。多光子显微技术已经成功用于追踪GFP标记的细胞和细胞结构,如C.Elegens线虫中的G蛋白受体,见图3。
图3 C.Elegens线虫中的G蛋白受体成像
实时活体肾血流动的灌注检测也是一个例子,两个通道使用一个Olympus 20X 1.0 NA物镜以30帧/秒(512*512分辨率)同时进行图像采集。血液与葡萄糖(血浆,绿色)和1微米荧光微球的混合物一起灌注。在血管中我们追踪两个独立的微球(A和B)。后续帧之间的高瞬时分辨率保证了各微球更极ng确的速度测量。在绿色的血浆之中我们还可以观察到一些暗色物体,这些暗色物体是红细胞,这样就为血液流动分析提供了额外的依据。
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