毓秀生物科技（上海）有限公司

  毓秀生物科技（上海）有限公司坐落于全国的科技、贸易、信息、金融和航运中心 上海。主要经营范围为生物技术的研究及推广等。主要有免疫组化,病理组织包埋染色,病毒包装,荧光定量Q-PCR检测,人源化抗体,载体构建,荧光原位杂交技术fish检测,ELISA检测,免疫荧光,CRISPR cas9 基因编辑等产品提供。 

  慢病毒包装原理

  慢病毒表达质粒包含了包装、感染、稳定整合宿主细胞基因组所需的遗传信息，包装辅助质粒则提供了所有的转录、包装和重组假病毒所需要的辅助蛋白。为产出高滴度的病毒颗粒，通常将表达质粒和包装质粒共同转染至包装细胞中进行病毒的包装。包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外培养液中。通过收集含病毒颗粒的上清，进行浓缩和纯化可获得高纯度和高滴度的慢病毒。

  慢病毒包装步骤

  1、转染前1天，将293T细胞接种于10 CM培养皿中，加入15 mL含10％FBS的DMEM培养液，置37℃，5％CO2培养至约70－80％融合时，进行细胞转染。

  2、转染293T细胞

    （1）将慢病毒表达质粒和包装质粒加入到Opti-MEM中，混匀。

   （2）将适量的Lipofectamine 2000 (invitrogen)加入到Opti-MEM中，混匀。

  （3）5分钟后，将上述两混合液混匀，室温静置20分种后，将混合液加入至培养皿中，前后左右晃动摇匀。置37℃，5％CO2培养箱中培养。

  3、6小时后，换含10％FBS的DMEM培养液10mL。

  4、转染48小时后，收集病毒上清，500g离心10分钟，0.45 m滤器过滤。

  5、浓缩纯化后，分装，-80℃保存。